摘 要 目的：通过比较不同断面颜色白术中白术内酯的含量，从而确定不同颜色的白术的质量，建立白术的质量标准。方法：采用外标法，HPLC法测量其中一个含量。Dikma Kromasil C。。(250 mm×4．6 miD．，5 pro)色谱柱，以乙腈(A)一水(B)为流动相梯度洗脱；
体积流量为1．0 mL／min，柱温为35℃，检测波长为220 nm(白术内酯I、III)、276 nm(白术内酯I)，进样量10uL。结果：白术内酯I.II.III分别在1．14～114、0．776“-＇77．6、3．21～321 ug／mL与峰面积呈良好的线性关系。结论：白术颜色白者与颜色棕者，其中白术内酯I.II.III含量差异较大，尤其白术内酯I.III含量白者多于棕者，故而白术白者质量优于棕者。

关键词：白术，I白术内酯I，断面颜色，白术内酯II，白术内酯III，高效液相色谱，含量测定 目录 摘 要 I 1 引言 1 1.1白术简介 1 1.2化学研究 1 1.3.1、利尿作用 1 1.3.2调节免疫 1 1.3.3抗凝血作用 2 1.3.4抗肿瘤作用 2 1.3.5对胃肠运动的影响 2 1.3.6抗菌作用 2 1.4总结 2 2实验部分 3 2.1仪器与药品 3 2.2方法与结果 3 2.2.1色谱条件 3 2.2.2对照品溶液的制备 3 2.2.7稳定性试验 4 2.2.8加样回收率试验 4 3分析与讨论 5 3.1检测器的选择 5 3.2吸收波长的确定 5 3.3流动相的选择 5 3.4提取方式的选择 5 3.5 白术药材的来源与选取 5 3.6 测量指标的选择 5 4结论 7 参考文献：
8 1 引言 1.1白术简介 白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephalaKoidz．的干燥根，主产地为浙江，安徽、此外河北，湖北、湖南及西南地区等省。味甘，性温，入脾胃经。具有补气健脾，燥湿利水，止汗的作用[1]。其主要活性物质为挥发油个类酯类成分。其中的内酯类成分具有抗炎、抗肿瘤的作用，还具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用，尤其以白术内酯I的作用明显。白术有多种炮制品，有白术、清炒白术、麸炒白术、土炒白术。生白术临床常被用以健脾祛湿、利水消肿，炒制可以制其燥性、增强其焦香之气，增强健脾益气之功能，麸炒可以增强其健脾消食的作用，土炒白术则多用于补脾阳，止泻。为有效控制白术质量，本实验采用HPLC法测定了白术不同断面颜色白术中的白术内酯I、II.II的含量I,建立白术外观与内在质量的关系，使白术的内在质量更直观，从而更好地指导用药者的用药，保证临床用药的效果。

1.2化学研究 白术主要含挥发油、内酯类化合物和多糖类成分。其中挥发油在白术饮片中占比大约为1.4%,其主要成分有苍术酮、苍术醇等,其中苍术酮在挥发油中含量占比为 31%-61%,挥发油中相对含量较高的还有 2-[(2-乙氧基-3,4-二甲基-2-环己烯)-1-甲基]-呋喃，其占挥发油的17%左右,β-3,4-二甲基-苯丁酸异丙酯约占 16.46%左右。利用气象色谱法提取白术的挥发油，其中相对含量最高的是蓬莪术烯 (48%左右),其次含量较高的有吉马烯(6.6%左右),1-亚甲基-4-甲基-7-[1-甲基乙烯基]-十氢萘(6%左右),邻苯二甲酸二丁酯(11%左右)等。对产于浙江的白术,以水蒸气蒸馏和超临界萃取法提取其中的挥发油,含量最高者都是苍术酮。

此外，从白术中还含有多种内酯类成分。其中有白术内酯I(atrcatylenolide Ⅰ)、白术内酯Ⅱ(atractylcnolideⅡ)、白术内酯Ⅲ(atractylcnolide Ⅲ)的含量较高，此外还含有白术内酯Ⅳ(atractylenolide Ⅳ)、双白术内酯、8,9-环氧白术内酯、4,15-环氧羟基白术内酯等微量内酯类成分。其中白术内酯 I 的含量在 0.1%左右，白术内酯Ⅲ的含量在 0.0150%～0.2230%之间。除此以外,多糖类成分[3]如白术三醇及维生素 A 等也是白术中含有的活性物质。

1.3药理研究 1.3.1、利尿作用 给予正常大鼠口服白术水煎液，可以使尿中电解质排除量增加，从而增加了尿液的排泄量。其原理可能为其中β—桉叶醇抑制了钠钾ATP酶，从而增加了体内电解质，尤其是钠的排除，继而增加排尿。

1.3.2调节免疫 白术水提液中的成分对机体免疫功能有促进作用。白术能提高巨噬细胞活性，活化中性粒细胞，提高外周血液中白细胞的数量，增强小鼠NK细胞的细胞毒活性。促进T淋巴细胞的增殖和转化，提高T 细胞总数和辅助性T细胞的数量。增强B淋巴细胞免疫功能，促进抗体生成，提高受环磷酰桉抑制小鼠的血清凝结素，溶血素抗体的水平。从而具有一定的免疫调节作用，可增强机体对抗能力。

1.3.3抗凝血作用 白术对血小板聚集有明显的抑制作用，白术煎剂0.5g/kg灌胃1~4周，能显着延长大鼠凝血酶元的时间。其作用较双香豆素弱，但较Butadio下降，3~4小时内未见恢复。

1.3.4抗肿瘤作用 白术挥发油和内酯成分不仅在体外对肿瘤细胞有抑制作用，可以抑制肿瘤细胞的增殖，还能提高机体对抗肿瘤细胞的能力，增强机体对肿瘤细胞的毒作用。所以有一定程度的抗肿瘤作用。

1.3.5对胃肠运动的影响 白术对回肠个小肠的运动具有双向的特点。在小剂量下，白术水提液能抑制回肠平滑肌的收缩，而给予实验动物浓度较高，剂量较大的白术量时，发现可以增强回肠平滑肌的收缩。白术对于小肠运动的影响与实验动物的状态有关，实验动物小肠运动低下时，其可以增强收缩，实验动物亢奋时，其可以抑制收缩。此作用的机制较为复杂，可能与白术中成分对平滑肌乙酰胆碱受体的作用有关。

1.3.6抗菌作用 研究发现，白术水提液能在体外多种细菌生长，而不能杀死细菌。

1.4总结 白术为我国常用中药材，为名副其实的大宗药材。其最常被用于各类消化系统疾病。正因为其用量大，所以不仅要从内在制定其质量标准，也须建立其外观与内在质量的关系，以指导患者用药。然而平常市面白术质量参差不齐，颜色也不相同。药典中记白术为黄白至淡棕色，此两种颜色相差悬殊，以往古籍中也有记载越白越好[10]。因为白术最常被用于消化系统疾病，而其中内酯类成分为作用基础，也因为其内酯类成分为其独有的，与苍术相区别的物质，故而本实验选取其中白术内酯I,II,III为指标，探讨其不同颜色的质量的优劣，也也验证古籍所载正确与否。

2实验部分 2.1仪器与药品 美国Agillent 1100高效液相色谱仪，二级阵列检测器，1100色谱工作站。白术内酯I、II、III对照品购自中国药品生物制品检定所，批号分别为1396—060123、1397—060123、1398—060123；
乙腈和甲醇皆为色谱纯，水为纯化水。白术药材购于西安雨润中药材专业市场，经陕西中医药大学鉴定教研室鉴定为菊科植物白术Amacrocephala Koidz．的干燥根。

2.2方法与结果 2.2.1色谱条件 色谱柱为C18(250 mm×4．6 mm，5 tim)；
流动相为乙腈(A)一水(B)，梯度洗脱：0～16 min，60％～76％A，16～18min76％---100％ A；
18～30 min，100％A；
流动相的体积流量为1.0 mL／min；
柱温为35℃；
检测波长为220nm(白术内酯I、III)、276 nm(白术内酯II)；
进样量为10 uL。理论塔板数以白术内酯I计算应该高于3 000。色谱图见图l 2.2.2对照品溶液的制备 称取白术内酯I、II.III对照品1.44mg.0.78mg.3.21mg精密称定，置于10 mL的容量瓶中，以甲醇溶解并添加至刻度，摇匀。

2.2.3供试品溶液的制备：称取两种白术饮片约1 g，置于50 mL规格的锥形瓶中，加入甲醇50 mL，超声提取30 min，过滤，浓缩，转移至100ml的容量瓶，再加入甲醇定容至100 mL，摇匀，即得。规定以颜色白者制得的供试品为供试品1，以颜色淡棕色者制得的为供试品2。

2.2.4线性关系考察 分别精密吸取白术内酯I、II.III混合对照品储备液0．1、0．3、0．5、1．0、2．0、5．0.7．0.9 ，1.0.1.25ml置于10ml的容量瓶中，加入甲醇定容，摇匀。在以上色谱条件下进行分析，分别以峰面积(y)为纵坐标，以质量浓度(x)为横坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程如下:白术内酯I、II、III分别在1．15～115、0．775～77．5、3．20~320ug／mL与峰面积呈良好的线性关系，回归方程分别为Y=4 350X+7．715、Y=2 878X+5．228、y=8 038X+14．94，r分别为0．999 9.0.9998.0.9999。

2.2.5精密度试验 精密吸取两种白术供试品溶液，在以上色谱条件下连续进样6次，分别测定白术内酯I、II、III的峰面积，结果如下：相对标准偏差分别为0.46％、0．37％、0．52％。

2.2.6重现性试验 取生白术饮片6份各约2.0 g，精密称定，以甲醇声提取，制备供试品溶液，在以上色谱条件下测定其峰面积，计算其中白术内酯I、II、III的质量分数，结果如下：其相对标准偏差分别为I.23％、2．55％、2．25％。

2.2.7稳定性试验 取白术供试品溶液，分别于0、l、3、5、10、15、24、32、48 h在上述色谱条件下进样分析，分别计算白术内酯I、II、III的质量分数，结果如下:其相对标准偏差分别为1．63％、0．99％、0．58％，结果表明供试品溶液在48 h内稳定。

图I 白术内酯I.III(A.220nm)和白术内酯II(B.276nm)和样品(C.D)HPLC图谱 2.2.8加样回收率试验 精密称取白术供试品粉末约1.0g，安供试品制备方法提取，分别精密加入1.0，2.0，3.0混合对照品溶液，制备供试品溶液，在各水平下平行操作3份，在供试品高效液相色谱条件下进样分析，计算回收率。结果如下：白术内酯I、II、III的平均回收率分别为96.33％、101.59％、99.78％，相对标准偏差分别为1.56％、1.39％、2.06％。

2.2.9样品测定 取各两种白术制备供试品溶液，进行测定，进样10UL，计算白术内酯I、II、III的质量分数，结果见表1。

表1不同断面颜色白术中自术内酯I、I、Ⅲ的测定结果 供试品 白术内酯I (mg/g) 白术内酯II (mg/g) 白术内酯III (mg/g) 内酯总量 (mg/g) 1 0.6098 0.3190 0.7961 1.7249 2 0.4753 0.2690 0.4521 1.1964 3分析与讨论 3.1检测器的选择 光电二极管阵列检测器可同时检测190-800nm全部紫外光和可见波长范围内的信号，进行一次检测，可以同时获得多个吸收。由于本实验需要检测白术内酯I.II.III三个成分，故而选择PDAD检测器可以方便地采集到每个成分的吸收数据，可以得到每一个峰的在线紫外吸收图，所以选择。

方法学的考察所用样品测定提取方法的方法学考察均符合要求，简化了白术测定的繁琐步骤，为探索制订完善的白术原药材的质量标准提供了依据。

3.2吸收波长的确定 利用二极管阵列装置同时获得样品的色谱图及每个色谱组分的光谱图，即三维时间—色谱—光谱图，在通过计算不同波长的相对吸收对比，对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图，并计算最大吸收波长。最后确定白术内酯I.III在220nm处有最大吸收，白术内酯II在276nm处有最大吸收。

3.3流动相的选择 本实验曾尝试以乙腈一水、甲醇一水等不同的流动相梯度洗脱供试品，发现以甲醇一水为流动相获得的峰形最为合适；
由于本实验须同时测定3个内酯成分，所以本实验尝试了不同的流动相比例，结果发现以甲醇—水为流动相梯度洗脱，三种成分的分离较好，3个成分的分离度皆大于1．5，拖尾因子也在0．95～1．05之间。

3.4提取方式的选择 分别考察了用不同溶剂，以水煎法，超声法、回流法等不同方式提取，并且在不同的提取时间下，提取不同的次数的考察，结果发现，以甲醇为容剂，采用超声提取法，提取30 min，提取一次，为完全提取白术的最适合的提取条件。

3.5 白术药材的来源与选取 本实验目的在于研究不同断面颜色的白术，其内在质量的差异，所以须确保其他条件的一致。所以在购买原料的时候，特地保证了两种白术的产地.质地.大小等条件的一致性，从而让白术断面的颜色成为本实验的唯一影响白术内酯类成分含量的因素。

3.6 测量指标的选择 白术药材中含有多挥发油，内酯类，多糖类等多种成分。其中挥发油类以苍术酮的含量最高，而苍术酮为白术与苍术的共有成分，而且苍术中的含量远高于在白术中的含量，故而未选择苍术酮为本实验的测量指标。类酯类成分中以白术内酯I,II ,III的含量最高，并且此三种成分具有很高的生理活性，对消化系统疾病有显著的作用，而且现实中白术也常被用于消化系统疾病[11]，故而本实验选取白术内酯I.II.III为指标，判断白术的质量。

4结论 本实验分别以HPLC法测定了不同断面颜色的两种白术中白术内酯I.II.III的含量，结果发现，在其他条件一致的情况下，断面颜色白的白术，其中白术内酯含量均明显高于断面颜色淡棕色的白术，其内酯总含量也高于淡棕色的，尤其白术内酯I和白术内酯III，二者的差异较大。所以由此看来断面颜色白的白术的质量好于棕色的白术。

参考文献：
[1] 中国药典[s]．一部.北京：中国中医药科技出版社，2015.95 [2] 毛俊浩,吕志良,曾群力,等. 白术多糖对小鼠淋巴细胞功能的调节[J]. 免疫学杂志,1996,12(4)：233 [3]余上才,章育正,赵慧娟,等.枸杞子和白术免疫调节作用的实验研究[J].上海免疫学杂志,1994,14(1)：12 [4]李岩,孙思予,周卓.白术对小鼠胃排空及小肠推进功能影响的实验研究[J].辽宁医学杂志,1996,16(4)：186 [5]马晓松,樊雪萍,邢治善.白术促进小鼠肠胃运动机制的探讨[J].中*国医院药学杂志,1995,15(4)：167 [6]马晓松,樊雪萍,陈忠,等.白术对动物胃肠运动的作用及其机制的探讨[J].中华消化杂志,1996,16(5)：261 [7]Endo K, Toguchi T, Toguchi F, et al. Antiinflammatory principles of Atractylodes[J]. Chem Pharm Bull,1979,27：2954 [8]李伟,文红梅,张爱华,等.白术质量标准研究[J].药物分析杂志, 2001,21(3)：170 [9]蒲含林,王正濂,黄巧娟,等.双白术内酯对豚鼠离体心房肌的作用[J].中国药学通报,2000,16(1)：60. [10]李中立.本草原始.学苑出版社 [11]殷静先.白术药理研究进展[J]时珍国医国要2000.11(6)：572 致谢 衷心感谢指导老师樊春娟在我实验和论文写作过程中对我的悉心指导和我实验过程中帮助我的同学，他们的言传身教和帮助将使我终生受益。

感谢药学院老师和同窗们的关心和支持。最后感谢本实验所借鉴的所有的前人的研究 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。

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